甲基绿是具有金属光泽的绿色微结晶或亮绿色粉末，属三苯甲烷类碱性染料，以两种形式存在。Ⅰ式分子式C26H33Cl2N3。分子量458.49。绿色结晶，带金黄光泽或淡绿色粉末。能溶于水，微溶于乙醇，不溶于醚。通常为氯化锌的复盐。Ⅱ式分子式C27H35BrClN3。分子量516.98。绿色粉末，能溶于水呈绿蓝色。在pH0.2时溶液呈黄颜色，pH1.8时呈蓝色。
甲基绿可用于测定维生素K3，对于维生素K3的测定主要有液相色谱法、荧光法及某些电化学分析法，迄今用分光光度法测定VK3的报道甚少。由于分光光度法有仪器价廉、操作简便、准确度高等优点在药物分析中广泛应用。因此，进一步研究和发展灵敏度高，简便快速测定VK3的新分光光度法具有重要意义。
研究发现，在pH为8.7~9.5的溶液中，当维生素K3与碱性三苯甲烷染料甲基绿作用时能使甲基绿产生褪色反应，其褪色波长为630 nm，并在紫外区的213 nm和261 nm处出现两个较弱的吸收峰，褪色反应的表观摩尔吸光系数ε630=2.13×105 L mo l-1 cm-1，其褪色程度(ΔA)与VK3浓度在0.11~2.40 mg/L的范围呈正比，反应具有很高的灵敏度，对于VK3的检出限(3σ)为32.0μg/L。反应也有良好的选择性，用于针剂中维生素K3的测定，取得了满意结果。本法不仅灵敏度高，而且简便快速。
